ATCC細胞株解凍和培養(yǎng)操作

　　凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會立即下降。

　　ATCC細胞株產品附帶一份產品資料單，其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ，產品資料單也可以在ATCC下載。此外產品還附帶細胞株具體生產批次的檢測報告，其中包含批次的特定信息，如每只凍存管中細胞的數(shù)量，無微生物污染的檢測結果等。

　　操作推薦

　　ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套，工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。檢查包裝，查看是否有任何事破綻或滲漏。東側的ATCC細胞株應處于固體狀。

　　將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出，理解復蘇培養(yǎng)，或迅速轉移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲。

　　1、 先準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞株培養(yǎng)瓶，及產品說明推薦的相應細胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預先溫熱細胞培養(yǎng)基

　　2、小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快，大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛融化，就應該將細胞凍存管取出水浴。

　　3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

　　4、小心擰干凍存管的頂部，將管內容物用1MI移槍轉移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘（125*g）.小心吸去上清液以去除抗凍劑（二甲基亞砜），避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉移到T125培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉移到T75培養(yǎng)瓶。

　　5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行卵育。細胞培養(yǎng)24小時候后應在顯微鏡下觀察細胞株形態(tài)和生長狀況 。