ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素

　　ATCC細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物，也就是說(shuō)，ATCC細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。
　　ATCC細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵因素：
　　1)，外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實(shí)驗(yàn)因素的干擾。
　　2)，整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
　　3)，整合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達(dá)質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
　　4)，整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
　　5)，使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個(gè)不同單克隆穩(wěn)定株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過(guò)使用混合穩(wěn)定株，或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定株進(jìn)行比較，可以幫助研究人員獲得更的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　一個(gè)好的ATCC細(xì)胞株有多方面要求：
　　1. 產(chǎn)量高，高的產(chǎn)量直接降低固定投資和單次生產(chǎn)成本。
　　2. 產(chǎn)品質(zhì)量符合要求。產(chǎn)品質(zhì)量影響藥效和安全性。
　　3. 穩(wěn)定性。產(chǎn)量和質(zhì)量在生產(chǎn)傳代過(guò)程中不應(yīng)有大的改變。一般認(rèn)為在60-90PDL產(chǎn)量變化不超過(guò)30%是可以接受的。
　　4. 與生產(chǎn)過(guò)程的相容性。細(xì)胞株需要適合大規(guī)模生產(chǎn)放大。
　　5. 合規(guī)。ATCC細(xì)胞株的構(gòu)建過(guò)程應(yīng)避免接觸或使用動(dòng)物來(lái)源成分或其它可能影響安全性的成分， 保證單克隆性（clonality）以及整個(gè)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)記錄完整。
　　凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運(yùn)送過(guò)程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲(chǔ)存。請(qǐng)不要將細(xì)胞存儲(chǔ)在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達(dá)不到-130℃，細(xì)胞活力會(huì)立即下降。
　　ATCC細(xì)胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細(xì)胞株的信息和詳細(xì)的操作指南。細(xì)胞株的所有詳細(xì)介紹可以在ATCC找到 ，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細(xì)胞株具體生產(chǎn)批次的檢測(cè)報(bào)告，其中包含批次的特定信息，如每只凍存管中細(xì)胞的數(shù)量，無(wú)微生物污染的檢測(cè)結(jié)果等。