淺談小鼠結腸癌細胞的傳代方法

小鼠結腸癌細胞培養條件：*培養基：DMEM高糖培養基90%；胎牛血清10%。

小鼠結腸癌細胞培養條件：37.0C  carbon dioxide（CO2）,5%

小鼠結腸癌細胞傳代方法：

收到細胞后，取出培養瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。

一、如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。

二、如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1、棄去培養液，用PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次。

2、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來。

3、加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中。1:3~1:6傳代；2~3天1次。　

小鼠結腸癌細胞傳代方法時需要注意的事項：傳代后一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

凍存方法：凍存液：基礎培養基+5%DMSO+20%FBS

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