ATCC菌種變異和被污染如何規(guī)避

　　ATCC菌種保藏?zé)o論采用何種保藏方法，首先應(yīng)該挑選典型菌種的優(yōu)良純種來進行保藏，保藏它們的休眠體，如分生孢子、芽孢等。其次，應(yīng)根據(jù)微生物生理、生化特點，人為地創(chuàng)造環(huán)境條件，使ATCC菌種微生物長期處于代謝不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態(tài)。這些人工造成的環(huán)境主要是干燥、低溫和缺氧，另外，避光、缺乏營養(yǎng)、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。

　　ATCC菌種保藏的方法多樣化：

　　1、斜面低溫保藏法

　　將ATCC菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌種生長*后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉(zhuǎn)接至新的斜面培養(yǎng)基上，生長后繼續(xù)保藏，如此連續(xù)不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數(shù)微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的ATCC菌種。放線菌、霉菌和有芽孢的細菌一般可保存6個月左右，無芽孢的細菌可保存1個月左右，酵母菌可保存3個月左右。如以橡皮塞代替棉塞，再用石蠟封口，置于4℃冰箱中保藏，不僅能防止水分揮發(fā)、能隔氧，而且能防止棉塞受潮而污染。這一改進可使ATCC菌種的保藏期延長。

　　該法的優(yōu)點是簡便易行，容易推廣，存活率高，故科研和生產(chǎn)上對經(jīng)常使用的ATCC菌種大多采用這種保藏方法。其缺點是菌株仍有一定程度的代謝活動能力，保藏期短，傳代次數(shù)多，ATCC菌種較容易發(fā)生變異和被污染。

　　2、石蠟油封藏法

　　此法是在無菌條件下，將滅過菌并已蒸發(fā)掉水分的液體石蠟倒入培養(yǎng)成熟的ATCC菌種斜面（或半固體穿刺培養(yǎng)物）上，石蠟油層高出斜面頂端lcm，使培養(yǎng)物與空氣隔絕，加膠塞并用固體石蠟封口后，垂直放在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏。使用的液體石蠟要求無毒，化學(xué)純規(guī)格，其滅菌條件是：150～170℃烘箱內(nèi)滅菌lh；或121℃高壓蒸汽滅菌60～80min，再置于80℃的烘箱內(nèi)烘干除去水分。

　　ATCC菌種由于液體石蠟阻隔了空氣，使菌體處于缺氧狀態(tài)下，而且又防止了水分揮發(fā)，使培養(yǎng)物不會干裂，因而能使保藏期達1～2年，或更長。這種方法操作簡單，ATCC菌種適于保藏霉菌、酵母菌、放線菌、好氧性細菌等，對霉菌和酵母菌的保藏效果較好，可保存幾年，甚至長達10年。但對很多厭氧性細菌的保藏效果較差，尤其不適用于某些能分解烴類的ATCC菌種。

　　3、砂土管保藏法

　　這是一種常用的長期保藏ATCC菌種的方法，適用于產(chǎn)孢子的放線菌、霉菌及形成芽孢的細菌，對于一些對干燥敏感的細菌如奈氏球菌、弧菌和假單胞桿菌及酵母則不適用。

　　ATCC菌種制作方法是，先將砂與土分別洗凈、烘干、過篩(一般砂用60目篩，土用120目篩)，按砂與土的比例為(1～2)：1混勻，分裝于小試管中，砂土的高度約1cm，以121℃蒸汽滅菌1～1.5h，間歇滅菌3次。50℃烘干后經(jīng)檢查無誤后備用。也有只用砂或土作載體進行保藏的。ATCC菌種需要保藏的菌株先用斜面培養(yǎng)基充分培養(yǎng)，再以無菌水制成108～1010個/ml菌懸液或孢子懸液滴入砂土管中，放線菌和霉菌也可直接刮下孢子與載體混勻，而后置于干燥器中抽真空約2～4h，用火焰熔封管口(或用石蠟封口)，置于干燥器中，在室溫或4℃冰箱內(nèi)保藏，后者效果更好。